二. 实验方法:
1.取一只孕16日龄的昆明种雌性小白鼠,颈椎脱臼法处死,先置于75%乙醇中浸洗一遍(2分钟),再置于75%乙醇中消毒5分钟;
2.用眼科剪以及止血钳先剪开雌鼠的腹部皮肤,钝性分离至两侧,充分暴露腹壁肌肉,然后小心剪开腹壁全层,切勿伤及内脏及小鼠胚胎;
3.剪开子宫,从宫腔中取出胚胎鼠,置入无菌平皿中;
4.用双抗-冷PBS将胚胎鼠体表洗涤两次,每次1分钟;
5.用显微外科剪刀将胚胎鼠的腹壁剪开,再用显微外科镊子夹起鼠胃,自贲门及幽门部切断,得到全胃,切掉并弃去近贲门的1/3,然后沿胃大弯处纵行切开鼠胃,充分暴露胃粘膜;
6.用双抗-冷PBS将胚胎鼠胃连续洗涤两次,每次1分钟;
7.将鼠胃置于含双抗的MEM培养液中浸洗2次,每次1分钟;
8.将鼠胃剪成极小的器官型植块,面积约1mm×1mm;
9.将植块置于12孔培养板的培养孔中央,每孔5块,间隔约2mm,布局合理,粘膜面向上,轻轻按压每块植块,使其紧贴培养板的表面;
10.沿培养孔的边缘,缓慢加入约0.5ml的完全MEM培养液,勿使培养液与植块接触;
11.将培养板置于37、5%培养箱中预孵育1小时;
12.每孔加完全MEM培养液2ml,轻拿轻放,切勿使植块飘起,实验组加GIC;
13. 实验组和对照组同步等量换液,每次去掉原液的1/2左右, 再加入相同量的新鲜MEM培养液;
14.用倒置显微镜观察植块生长情况,用显微成像记录分析系统记录所观察的结果,并用计算机保存图像。
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