|
二. 实验方法：
1．取孕16日龄的昆明雌性小白鼠，颈椎脱臼法处死之，先置于75%乙醇中粗洗一遍（2分钟），再置于75%乙醇中消毒5分钟；
2．用眼科剪以及止血钳先剪开雌鼠的腹部皮肤，钝性分离至两侧，充分暴露腹壁肌肉，然后小心剪开腹壁全层，切勿伤及内脏及小鼠胚胎；
3．剪开子宫，从宫腔中取出胚胎鼠，置入无菌平皿中；
4．用双抗-冷PBS将胚胎鼠体表洗涤两次，每次１分钟；
5．用显微外科剪刀将胚胎鼠的腹壁剪开，再用显微外科镊子夹起鼠近胃端小肠（包括十二指肠和空肠），截取２cm左右；
6．用双抗-冷PBS将胚胎鼠小肠连续洗涤两次，每次1分钟；
7．用显微外科剪刀将肠管纵行切开，充分暴露粘膜面；
8．用双抗-冷PBS将胚胎鼠小肠连续洗涤两次，每次1分钟；
9．将鼠小肠置于含双抗（青、链）的MEM培养液中冲洗2次，每次1分钟；
10．将鼠小肠剪成极小的器官型植块，大小约1mm×1mm；
11．将植块置于12孔培养板的培养孔中央，每孔5块，间隔约2mm，布局合理，粘膜面向上，轻轻按压每块植块，使其紧贴培养板的表面；
12．沿着培养孔的边缘，每孔中加入约0.5ml的完全MEM培养液，勿使培养液与植块接触；
13．将培养板置于37 ，５％ 培养箱中预孵育１.5小时；
14．每孔加完全MEM培养液2ml，轻拿轻放，切勿使植块飘起，实验组加GIC；
15．实验组和对照组同步等量换液，每次去掉原液的1/２左右, 再加入相同量的新鲜MEM培养液；
16．用倒置显微镜观察植块生长情况，用显微成像记录分析系统记录所观察的结果，并用计算机保存图像。
下一页 > 实验结果
|
